技術(shù)文獻(xiàn)
技術(shù)文獻(xiàn)
?? 概述
PCR產(chǎn)物為雙鏈DNA分子,其穩(wěn)定性受溫度影響極大。高溫會(huì)加速水解反應(yīng)和酶促降解,導(dǎo)致DNA斷裂;低溫則能有效抑制這些過(guò)程。因此,選擇合適的保存溫度是確保后續(xù)克隆、測(cè)序或電泳實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。
??? 不同溫度下的穩(wěn)定性表現(xiàn)
以下表格總結(jié)了PCR產(chǎn)物在不同溫度條件下的穩(wěn)定性和推薦保存時(shí)長(zhǎng):
(補(bǔ)充說(shuō)明)有研究表明,DNA比RNA更耐熱,短時(shí)間室溫放置不會(huì)立即完全降解,但仍可能出現(xiàn)彌散條帶或產(chǎn)量下降的現(xiàn)象 。
此外:若將PCR產(chǎn)物溶于Tris緩沖液而非純水,可在-20℃下延長(zhǎng)保存時(shí)間至1–2個(gè)月,因緩沖液能提供更穩(wěn)定的pH環(huán)境 ()]。
采用真空干燥后凍存的方法,可使PCR產(chǎn)物在-20℃下保存長(zhǎng)達(dá)一兩年。
? 建議
為保證PCR產(chǎn)物的最佳穩(wěn)定性:
長(zhǎng)期保存:優(yōu)先選擇-20℃或-80℃,并分裝避免反復(fù)凍融;
短期使用:4℃存放不超過(guò)3天;
立即使用:可在室溫短暫放置,但應(yīng)控制在48小時(shí)內(nèi) 。
