技術(shù)文獻(xiàn)
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技術(shù)文獻(xiàn)
榛果源性核酸檢測(cè)試劑盒 PCR-熒光探針?lè)?/strong>反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
磷酸化雄激素受體抗體 phospho-Androgen Receptor (Ser791)
磷酸化雄激素受體抗體 phospho-Androgen Receptor (Ser94)
磷酸化雄激素受體抗體 phospho-Androgen Receptor (Tyr363)
錨定蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白激酶ANKK1抗體 ANKK1
磷酸化內(nèi)收蛋白抗體 phospho-alpha Adducin (Thr445)
膜粘連蛋白11抗體 Annexin A11
膜粘連蛋白13抗體 Annexin A13
磷酸化促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH抗體 phospho-ACTH (Ser168)
磷酸化蛋白激酶AKT1抗體 phospho-AKT1 (Ser246)
磷酸化蛋白激酶B抗體 phospho-AKT1/3 (Tyr473)
磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體 phospho-alpha 1 Sodium Potassium ATPase (Tyr260)
磷酸化內(nèi)收蛋白a1抗體 phospho-alpha Adducin(Ser436)
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體 phospho-AMPK alpha 1 (Ser487)
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體 phospho-AMPK alpha 2 (Ser345)
酸性神經(jīng)酰胺酶1抗體 ASAH1
粘附調(diào)節(jié)分子1抗體 ADRM1
氣味結(jié)合蛋白抗體 Aphrodisin
乙醛脫氫酶2抗體 ALDH2
膜粘連蛋白10抗體 Annexin A10
前梯度同源蛋白2抗體 Anterior Gradient 2
磷酸化雄激素受體抗體 phospho-Androgen Receptor (Ser94)
磷酸化雄激素受體抗體 phospho-Androgen Receptor (Tyr363)
錨定蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白激酶ANKK1抗體 ANKK1
磷酸化內(nèi)收蛋白抗體 phospho-alpha Adducin (Thr445)
膜粘連蛋白11抗體 Annexin A11
膜粘連蛋白13抗體 Annexin A13
磷酸化促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH抗體 phospho-ACTH (Ser168)
磷酸化蛋白激酶AKT1抗體 phospho-AKT1 (Ser246)
磷酸化蛋白激酶B抗體 phospho-AKT1/3 (Tyr473)
磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體 phospho-alpha 1 Sodium Potassium ATPase (Tyr260)
磷酸化內(nèi)收蛋白a1抗體 phospho-alpha Adducin(Ser436)
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體 phospho-AMPK alpha 1 (Ser487)
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體 phospho-AMPK alpha 2 (Ser345)
酸性神經(jīng)酰胺酶1抗體 ASAH1
粘附調(diào)節(jié)分子1抗體 ADRM1
氣味結(jié)合蛋白抗體 Aphrodisin
乙醛脫氫酶2抗體 ALDH2
膜粘連蛋白10抗體 Annexin A10
前梯度同源蛋白2抗體 Anterior Gradient 2
