當(dāng)從細(xì)胞庫(kù)購(gòu)買(mǎi)的凍存或正處于增殖期的細(xì)胞，可對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增和重新凍存。不過(guò)，凍存操作可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)有所影響。下列實(shí)驗(yàn)方案為大家提供了一份使用無(wú)蛋白成份的凍存培養(yǎng)基凍存細(xì)胞的基礎(chǔ)指南。

● 使用37°C水浴化凍無(wú)蛋白成份的凍存培養(yǎng)基或4°C條件下過(guò)夜化凍。

● 如果在水浴中進(jìn)行化凍，請(qǐng)確保溫度不要超過(guò)37°C，也勿將該產(chǎn)品延長(zhǎng)時(shí)間置于37°C。

● 無(wú)蛋白成份的凍存培養(yǎng)基在使用前應(yīng)置于4°C條件下徹底平衡。為獲得最優(yōu)結(jié)果，推薦大家使用能夠控制變溫速率的冰箱。如果缺少能夠控制變溫速率的冰箱，也可使用細(xì)胞凍存盒。

● 如需用酶試劑解離培養(yǎng)器皿表面的細(xì)胞，則需使用對(duì)應(yīng)的終止溶液重懸細(xì)胞以中和酶的效果。

● 通過(guò)離心沉淀細(xì)胞。

● 去除上清液后，使用預(yù)冷的無(wú)蛋白成份的凍存培養(yǎng)基以5x10E5至3x10E6細(xì)胞/毫升的密度重懸細(xì)胞。

● 將細(xì)胞懸液分裝至合適數(shù)量的凍存管中。

● 將細(xì)胞盡快冷卻至4°C。

● 如果使用控制變溫速率的冰箱:以每分鐘降低1°C的速率冰凍樣品，直至–40°C。之后按照每分鐘降低2°C的速率降至–90°C左右。

● 如果使用細(xì)胞凍存盒:請(qǐng)按照說(shuō)明書(shū)來(lái)準(zhǔn)備凍存盒。

● 為獲得最佳結(jié)果，推薦大家在細(xì)胞溫度降至–80°C后，盡快將凍存管轉(zhuǎn)移至液氮儲(chǔ)存設(shè)備的氣相中。

● 作為無(wú)蛋白成份的凍存培養(yǎng)基的替代品，可使用該凍存細(xì)胞推薦的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加10%胎牛血清(FBS)和10% DMSO進(jìn)行細(xì)胞凍存。

請(qǐng)注意:由于凍存設(shè)備與個(gè)人技術(shù)之間的差異，我們無(wú)法確保使用本方案凍存的細(xì)胞在復(fù)蘇后能夠保持活力，我們也無(wú)法為研究用戶實(shí)驗(yàn)室凍存細(xì)胞的效果進(jìn)行擔(dān)保。